猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗联合免疫试验

yuanfenwuyue 网络 2013-10-30 07:21:38
周绪斌，丹尼，董恩求，王树臣，李聪，栗娟，顾洪杰，   疫苗是猪场 防制疫病的重要工具，尤其随着我国规模化、集约化养殖业的发展以及面对疾病复杂化的现状，制定和实施科学的免疫程序是确保猪场稳定生产的关键性环节。如今多数猪场已经认识到免疫的重要性，但是由于目前猪场应用疫苗种类繁多，而且需要多次接种，这一方面增加了饲养管理人员的工作量，另一方面加重了猪群的应激。因此在制定猪群尤其是仔猪免疫程序时仍然面对许多疑问，这些疫苗免疫接种应该如何合理安排?不同疫苗同时接种是否有干扰作用?或者说为了减少应激和工作 量，哪些疫苗可同时接种?   在众多猪病中，猪瘟毫无疑问仍是当前我国猪群的重要威胁，在猪病复杂化的现状下更不能忽视猪瘟的危害，做好猪瘟的免疫预防仍是猪场的头号重任。此外，给当前猪场造成严重危害的另一类疾病是猪呼吸道病综合征(Porcine Respiratory Dis-ease Complex，PRDC)，表现为咳嗽、气喘、呼吸困难、消瘦、生长不良、死亡率增加，剖检以肺部病变为主，治疗效果通常不理想，致病因素包括病毒、细菌 、支原体以及管理。其中，引起地方流行性肺炎(enzoot-ic pneumonia，猪喘气病)的猪肺炎支原体(My-coplasma hyopneumoniae)无疑是导致PRDC的核心因素。全球超过80％的猪场存在猪肺炎支原体感染，我国猪群肺炎支原体感染也非常普遍，种猪阳性率超过90％，后期肥育猪的血清阳性率接近100％。猪肺炎支原体黏附于气管和支气管黏膜纤毛，破坏上皮细胞表面纤毛的清除功能。另外，肺炎支原体侵害猪呼吸道的免疫系统 ，因此，动物感染肺炎支原体后更易受共同感染的其他病原如细菌、病毒和寄生虫侵袭。这也说明，减少猪肺炎支原体的危害在控制PRDC中非常关键。   肺炎支原体灭活疫苗已经在田间得到广泛应用，在许多国家超过70％的猪场使用肺炎支原体疫苗。虽然接种疫苗不能阻止感染，但通常情况下疫苗接种后曰增重提高2％~8％，饲料转化率提高2％～5％，免疫猪群肥育上市时间缩短，临床症状、肺部病变减轻，药物治疗费用降低，猪场的经济效益明显提升 。   传统的仔猪猪瘟疫苗的免疫程序通常是20—60模式，即3周龄首免、8周龄二免；猪肺炎支原体疫苗的使用也是在早期，通常采用7—21模式，即l周龄首免、3周龄二免。那么是否有可能将猪瘟的首免疫苗与肺炎支原体的二免疫苗进行联合注射呢?二者同时免疫是否对猪瘟抗体的生成有干扰作用呢?为此我们设计试验进行了田间研究，现将结果报告如下。   1材料与方法   1．1试验动物和疫苗   疫苗免疫试验于2008年3—7月在河北省唐山市玉田牧富公司 种猪场进行，该场为拥有基础母猪1 500头的原种猪场。首先通过全群系统监测了解猪群的免疫状况，选择3头同期分娩的健康长白纯种母猪所产仔猪进行试验，期间试验猪按猪场正常生产流程管理，所有仔猪所处环境条件和饲养管理条件相同。   猪肺炎支原体疫苗为喜可舒(Mypravacsuis)，由海博莱生物大药厂生产，批号为5M9K-1，有效期到2009年4月，每次免疫均为肌肉注射l头份，即2mL。猪瘟疫苗为脾淋苗，浙江荐量生物工程有限公司生产，批号为971168，有效期到2008年11月，首免4头份，二免1头份。种猪的猪瘟 免疫程序为1年2次普免。   1．2试验设计   母猪编号为Sl、S2、S3，每头母猪所产12头仔猪随机平均分到A、B、C、D4个组中，并对每头仔猪打耳标编号，原圈饲养。   试验设计如表l所示，A组仅免疫猪瘟疫苗；B组和C组仔猪均在3周龄同时接种喜可舒和猪瘟疫苗，其中B组在仔猪颈部两侧分别注射，C组用喜可舒稀释猪瘟疫苗后混合注射；D组分别在不同时间点注射喜可舒和猪瘟疫苗，即2、4周龄注射喜可舒，3、8周龄接种猪瘟疫苗。   1．3血样采集    分别在1、3、8、10和13周龄疫苗接种之前前腔静脉采血，之后分离血清，-20℃冻存，待试验结束后统一检测。   1．4检测方法   猪瘟抗体的检测采用阻断ELISA方法，所用试剂盒为CIVTESTIM suis HC／PPC(海博莱生物大药厂生产)，试验操作参照试剂盒说明书进行，抗体滴度用阻断率表示。   1．5统计分析   试验数据采用SPSS软件进行方差分析。   2试验结果   2．1各组猪瘟抗体检测结果   由于试验过程中仔猪的死亡以及采血 过程中的操作误差，本研究仅对1周龄、3周龄、8周龄、10周龄、13周龄5次采样都齐全的仔猪的猪瘟抗体滴度进行了分析。分析结果表明，在首免之前，即仔猪l周龄时，各组间猪瘟抗体滴度差异不显著(F=0．379，P=0．769>0．05)；3周龄时，各组间差异不显著(F=0.892，P=0．462>0．05)；8周龄时，各组间差异显著(F=4．073，P=0．021<0．05)，进一步两两比较，C组极显著低于B组(P=0.002<0.01);10和13周龄时，各组间差异不显著(10周龄：F=0．320，P=0．81 1>0．05；13周龄：F=0．076，P=0.972>0.05)详见表2。   2．2各组猪瘟抗体滴度的变化情况   A组仔猪 仅在3、8周龄免疫猪瘟疫苗，除8周龄猪瘟抗体滴度显著低于3周龄(P=0．01<0．05)外，其余各时间点间差异不显著，见图1。   B组仔猪是在1、3周龄免疫喜可舒，3、8周龄免疫猪瘟疫苗，其中3周龄时喜可舒二免与猪瘟首免同时进行，但是在仔猪颈部两侧分别注射。统计分析表明，l、3、8、10、13周龄各时间点间猪瘟抗体滴度差异均不显著(F=1．146，P=0．354>0．05)，见图2。       C组仔猪免疫程序与B组相同，但是在3周龄时，用喜可舒作为猪瘟疫苗的稀释液，将二者混合 注射。统计分析表明，猪瘟抗体滴度差异极显著(F=6．858，P=0．001<0．01)，进一步两两比较，8周龄猪瘟抗体滴度极显著低于l、3、10、13周龄(P分别为O、0．001、0、0．005)，其余各时间点间差异不显著，见图3。   D组仔猪猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗分别接种，即2、4周龄接种喜可舒，3、8周龄接种猪瘟疫苗。统计分析表明，猪瘟抗体滴度差异极显著(F=4．609，P=0．008<0．01)，进一步 两两比较，8周龄猪瘟抗体滴度极显著低于l、3、lO周龄(P分别为0．007、0．004、0．004)，其余各时间点间差异不显著，见图4。   3讨论   3．1猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗同时接种对猪瘟抗体生成无干扰作用   猪瘟和PRDC的防控是当前猪场非常关注的问题，免疫预防也是最有效的手段。但是如何合理安排免疫程序的确在很多猪场存在困扰。频繁接种、多次保定对仔猪产生较大的应激，在当前猪场，应激过大也是造成猪群免疫力下降、生长性能欠佳、疾病多发的重要原因。因此疫苗联合接种 一方面有利于减轻对猪群的应激作用，另一方面也节省劳动力。   本试验采用ELISA方法检测猪瘟抗体滴度并分析变化动态，最佳的方法是血清中和试验。虽然产生抗体只是疫苗免疫的反应，并不完全代表保护水平，但是可在很大程度上显示疫苗的应答反应。已经有报告表明，ELISA试验和猪瘟血清中和试验结果存在很大程度的相关性，特别是CIVTESTTMsuis HC／PPC ELISA试剂盒可以代表猪瘟中和抗体的变化。   试验结果表明，在1周龄和3周龄时，4个组仔猪的猪瘟抗体滴度均无显著差异，说明猪瘟母源抗体滴度相同，4个组为随机分组；而到试验 结束时(13周龄)，4个组猪瘟抗体滴度也没有显著差异，说明喜可舒与猪瘟疫苗同时接种甚至利用喜可舒作为猪瘟疫苗的稀释液并不干扰猪瘟抗体滴度的变化。对于猪瘟免疫采取20一60模式的猪场，可以将猪肺炎支原体疫苗的二免与猪瘟疫苗的首免在仔猪颈部双侧同时进行，这样有利于减轻劳动强度并减少应激作用。   3．2利用ELISA抗体监测可以评估猪瘟疫苗免疫程序   通过对4个组猪瘟抗体滴度变化的统计分析发现，仔猪3周龄与1周龄时猪瘟抗体滴度并无差异。当前多数猪场免疫程序 都采用20—60模式，即3周龄首免。值得关注的是，除8组外，各组仔猪8周龄时抗体滴度都有下降的趋势，说明首免并未产生实际的免疫效果。综合判断，很可能是母源抗体干扰的结果，也就是说仔猪3周龄时母源抗体仍处于较高水平。如果母猪的免疫状况较佳，而且母猪的泌乳能力较为正常，仔猪吸取初乳得到保证，仔猪首免时间可稍微后推，即在4～5周龄时首免。相反在8周龄二免后，所有组抗体滴度都有上升，显示出疫苗的加强效应。   当然不同的猪场由于母猪免疫程序不同，母源抗体水平 不一，但很大程度上这种差异与疫苗质量以及初乳的吸取有关。如果母猪在妊娠期使用疫苗的话，母源抗体水平更高，仔猪早期免疫受到的干扰作用更大。   有趣的是，在B组中，3周龄时喜可舒与猪瘟疫苗同时注射，8周龄时仍维持较高的猪瘟抗体水平，与其余3组不同的是，从1周龄到试验结束时(13周龄)抗体水平没有发生波动，这是否提示喜可舒有提高猪瘟疫苗免疫反应的作用还有待于进一步研究，有可能喜可舒独特的佐剂组成起到了免疫增强作用，因为其佐剂 中含有树脂carbomer和左旋咪唑，已有相关报告指出，在注射猪瘟疫苗时应用左旋咪唑能提高疫苗免疫应答。黎作华也有相关报告，分别采用黄芪多糖、左旋咪唑、亚硒酸钠维生素E作为免疫增强剂与猪瘟疫苗同时注射，结果发现注射免疫增效药物的3个组猪瘟抗体合格率均高于对照组，其中左旋咪唑的效果最为显著。注射猪瘟  
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