母猪繁殖障碍又称繁殖障碍综合征，其病因有非传染和传染性两类，猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)等是引起母猪繁殖障碍疾病的主要病原微生物。猪瘟是由CSFV引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病，其特征为发病急、高热稽留和细小血管变性，引起全身泛发性小点出血，脾脏梗死;猪繁殖与呼吸综合征是由PRRSV引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，其特征为厌食、发热、怀孕后期发生流产，产死胎和木乃伊胎，幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡;猪圆环病毒病是指以PCV2为主要病原、单独或继发或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的总称，其临床症状特征主要为体质下降、消瘦、贫血、黄疽、生长发育不良、腹泻、呼吸困难、母猪繁殖障碍、内脏器官及皮肤的广泛病理变化;猪伪狂犬病是由PRV引起的一种急性传染病，临床特征为体温升高，新生仔猪表现神经症状，成年猪常为隐性高感染，妊娠母猪感染后可引起流产、死胎及呼吸系统症状。
贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎。据述，该猪场2016年8月份对CSFV、口蹄疫(FMDV)和PRV进行了普免。该猪场保育猪中出现体温升高、嗜睡、皮肤发红、食欲废绝、喘气、被毛粗乱、精神沉郁、喜卧等症状。病猪剖检可见皮下大量出血点;肾脏布满针尖状出血点;肺脏存在间质性肺炎、胸腔积液、心包积液。根据上述情况，怀疑该起病例与病毒感染相关。为了进一步确诊，对CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等6种常见病原进行了实验室核酸检测，现将检测过程报道如下。
1、材料
1.1 病料
贵州省某种猪场送检的母猪流产死胎。
1.2 试剂
根据GenBank中关于CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV序列设计并合成6对特异性引物引物(预扩增条带大小分别为CSFV 508 bp、PRRSV 434 bp、PCV2 353 bp、PRV 305 bp、PPV 271 bp和JEV 1 015 bp)，核酸提取试剂盒，PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0等。
2、方法
通过该养殖场送检人员了解饲养情况、免疫接种、发病死亡情况、药物治疗和临床症状之后将送检流产死胎进行解剖观察并记录。将采集的组织混合样品研磨匀浆，液氮反复冻融3次后12 000 r/min离心10 min，取上清，用TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。
按照一步法PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0试剂盒说明书对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV进行检测。反应总体系为50 μL：2 1 Step Buffer 25 μL，模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H2O 14 μL;反应条件均为：95 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环;72 ℃ 10 min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。
